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小腸固有層單細胞懸液制備儀操作流程

更新時間:2025-02-21   點擊次數(shù):2460次

腸道黏膜是身體重要的免疫屏障,由相關(guān)的淋巴組織和免疫細胞構(gòu)成。腸道黏膜異常被認為與多種疾病密切相關(guān),如炎癥性腸病、IgA 腎病等。

科學家從未停止對腸道黏膜免疫屏障的探索。腸道固有層分布著豐富的免疫細胞,他們在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要,制備相應的單細胞懸液,對腸道固有層細胞進行研究,對探索腸道疾病的發(fā)病機制、疾病治療的作用靶點以及藥物起效的作用機制具有重要意義。

單細胞懸液制備步驟

1、小腸樣品制備

采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術(shù)臺,于腹部噴灑 75% 乙醇消毒,對皮膚和肌肉層進行中線切口,暴露腸道,并從盲腸端開始截取 10 cm 小腸, 隔醫(yī)用紗布放置于冰上,小心地用眼科手術(shù)剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織,并去除派氏結(jié)。縱向剖開小腸,PBS 緩沖液沖洗腸道內(nèi)容物直至干凈。

2、試劑配置

根據(jù)后續(xù)實驗選擇配套的消化酶試劑盒,流式分析,原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒。

3、小腸固有層單細胞懸液制備

每個樣品準備好對應的消化酶和終止液,常溫解凍。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術(shù)剪剪成小塊( 約5 mm長) 。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中。

將消化管放入單細胞胞懸液制備儀上,選擇對應的腸道程序,程序結(jié)束后,儀器自動停止,然后加入終止液,離心,棄掉上清,用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細胞懸液。(如下圖)

采用單細胞懸液制備儀進行,可批量制備單細胞懸液,節(jié)約了實驗時間,儀器上有人體和小鼠各個組織、器官對應的程序,提高了單細胞懸液制備的活率和得率,使后續(xù)實驗進行更加順利。


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